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武汉贝科新肽科技有限公司
主营：原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
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用水稻原生质体进行亚细胞定位时，为什么不拍摄叶绿体的自发荧光？
经测验，使用水稻黄化苗制备原生质体，载体转化效率及基因表达强度较高，而黄化苗中叶绿体较少，因此水稻原生质体定位拍照时，除非与叶绿体共定位，否则不拍摄叶绿体的自发荧光。
为什么要提供GFP空载的对照图片？
（1）作为整个实验过程中的操作参照，可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。
（2）作为载体体系的参照，确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。
基因法转化洋葱表皮细胞：
分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1 μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央，进行轰击，实时荧光定量，之后放置25℃避光过夜培养，使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。
细胞膜及内膜系统相关的协同作用
黏着斑激酶（FAK）定位于细胞质黏着斑、细胞核和内体中。在细胞质黏着斑中，FAK 通过调控细胞黏着斑的解聚与组装及多个蛋白质的磷酸化从而调节细胞的增殖和迁移。在内体中，FAK 通过 FERM 结构域定位到内体并被。内体中整合素的信号转导时间比质膜上持续的时间更长，并且能够阻止肿1瘤细胞发生失巢凋亡，因此，内体 FAK 可通过抵抗失巢凋亡促进肿1瘤细胞的转移。而在细胞核中，FAK 可导致 p53 的多聚泛素化及降解，从而影响正常细胞的存活和肿1瘤细胞的生长。此外，核 FAK 还能够通过调节细胞的因子和趋化因子的表达促进肿1瘤免疫逃逸的发生。这表明 FAK 在不同亚细胞定位下，与不同的蛋白质协同作用，共同调控肿1瘤的发生和发展。
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第4年
