体外培养贴壁细胞重要的生长特点有:贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。贴附并伸展,是多数体外培养细胞的基木生长特点。虽然血细胞如淋巴细,胞在体内并尤聚集的倾向并在体外可于悬浮状态中生长,但是大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物而生长,在体外时这些底物可以是其他细胞、胶原、玻璃或塑料等。
一些特殊的促细胞附着的物质(如层粘连蛋白、纤维链接蛋白、III型胶原、扩展因子等)可能参加细胞的贴附过程。这些促细胞附着因子均为蛋白质,存在于培养液尤其之中。在培养过程中,这些带阳电荷的促贴附因子先吸附于底物上,悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴附物质的底物附着,以后细胞将伸展成其原来的形态。一-般来说,从底物脱离下来的贴附生长型细胞,不能长期在悬浮中生长而将逐渐退变,玻璃正电荷处理,除非这是一些转化了的细胞或细胞。另外,上海正电荷处理,经过无驯化后的细胞,会从贴壁生长转到悬浮生长,目前在生物工程制药领域,趋势是使用无的悬浮培养为主。
2、贴壁细胞如何分离下来?
如果把贴壁的细胞洗下来常用的办法就是加入胰蛋白酶消化,37°C环境下放置3~5min便可,但是残留培养瓶内的胰蛋白酶对细胞有毒性作用,正电荷处理工艺,所以都会添加低浓度的以中和胰蛋白酶的。用超声的办法也可以把细胞分离下来,但是要注意超声的频率不能太大,而且细胞很娇嫩,超声会导致细胞的。这是由细胞的性质特点决定的。
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