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武汉科锐诺生物科技有限公司
主营：外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务
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外泌体分离提取方案。主要方案包括：
1、差速超1速离心法；
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品；
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法；
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品；
3、超滤提取法；
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法，做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中，通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括：透射电镜（形态鉴定）、NTA检测（粒径及浓度鉴定）、WB（分子标志物）。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一，可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好，纯度较高的外泌体样品，胞外囊泡电镜服务，粒径分布在30-150nm，原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量，对每一个样品，都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日，可当天到样当天出结果。
外泌体的提取方式：
1、离心法：此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足。
2、过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样纯度不足。
3、密度梯度离心法：用此种方法分离到的外泌体纯度较高，但是前期准备工作繁杂
4、免1疫磁珠法：这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单，但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。
5、色谱法：此种方法分离出的外泌体大小均一，但设备特殊，应用不广泛。
实验室采用Zetaview（品牌：Particle Metrix）进行外泌体浓度粒径测试服务。其方法即纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA），原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。Zetaview包含的微电泳技术，也可进行zeta电位的检测。
目前配备为488nm波长的激光器，且搭配对应的滤光片，可以测量荧光抗1体标记的外泌体。
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第2年
