武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、ELISA试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的***产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域。
1.一次ELISA实验需要多长时间?
双抗1体夹心ELISA法一次实验需要3.5-4小时,竞争ELISA法一次实验需要2-2.5小时。
2.血1清样本如何处理?
全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,LIF ELISA试剂盒,应再次离心。
3. 血浆样本如何处理?
建议选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,于1000×g离心15分钟,仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
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封藏的方法:
封片前应根据材料的大小,选用不同规格的盖玻片。材料透明后,在桌上放一张洁净的吸水纸,将含材料的载玻片从二甲本中取出放在纸上(切片的一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴树胶(千万不能待二甲本干燥后再进行),用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧,稍为倾斜使其左侧与封藏剂接角,然后再缓慢地将盖玻片放下,这样就可以减少或避免产生气泡。如胶液不足,可以用玻棒再滴一滴树胶从盖玻片边缘补足。如胶液过多,可在干燥以后用刀刮去,并用纱布蘸二甲本拭去残留的树胶。
染色结果:细胞核被苏1木素染成蓝色,细胞质被伊红染色呈粉红色。
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1、染色过强 原因 解决办法 抗1体的浓度过高或抗1体孵育时间过长 降低抗1体滴度(一般指浓缩性抗1体)抗1体孵育时间:室温1 小时或4℃过夜 孵育温度过高,孵育温度超过37℃ 一般室温20-28℃ DAB 显色时间过长或 DAB 浓度过高 显色时间不能超过5-10分钟,以显微镜下观察为准 2、非特异性背景染色 原因 解决办法 操作过程中冲洗不充分 每步冲洗3×5 组织中含过氧化物酶未阻断 可再配置新鲜3%H2O2封闭,孵育时间延长 组织中含内源性生物素 正常非免疫动物血1清再封闭 血1清蛋白封闭不充分 延长血1清蛋白封闭时间
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