间接法中另一种干扰因素为正常血1清中所含的高浓度的非特异性。1人血1清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强,elisa试剂盒厂家,非特异IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中,抗原包被后一般用无关蛋白质(例如牛血1清蛋白)再包被一次,以封闭(blocking)固相上的空余间隙。另外,在检测过程中标本须先1行稀释(1:40~1:200),以避免过高的阴性本底影响结果的判断。
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血1清
血1清是常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简单。
用无热原、无内毒1素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,elisa试剂盒,使血1清析出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血1清更大程度的析出。)4℃1000×g离心20min,仔细收集上清。建议将血1清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
酶标比色仪简称酶1标仪,通常指***于测读ELISA结果吸光度的光度计。针对固相载体形式的不同,各有特1制的适用于板、珠和小试管的设计。许多试剂公司配套供应酶标1仪。酶标1仪的主要性能指标有:测读速度、读数的准确性、重复性、精1确度和可测范围、线性等等。优良的酶标1仪的读数一般可精1确到0.0 01,准确性为±1%,重复性达0.5%。举例说,若某孔测得的A值为1.083,则该孔相对于空气的真实A值应为1.083± 0.01(1.073~1.093),重复测定数次,其A值均应1.083±0.05(1.078~1.088)在之间。酶1标仪的可测范围视各酶标1仪的性能而不同。普通的酶标1仪在0.000~2.000,新型号的酶标1仪上限拓宽达2.900,甚至更高。超出可测上限的A值常以'*'或'over'或其它符号表示。应注意可测范围与线性范围的不同,线性范围常小于可测范围,elisa 试剂盒,比如某一酶标1仪的可测范围为0.000~2.900,而其线性范围仅0.000~2.000,这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。
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