默沙克-小鼠elisa试剂盒-大小鼠elisa试剂盒

2. 标准曲线线性不佳，或是平行性不好。

a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因：操作时间拖太久。

解决办法：请在方法熟练后再进行操作。

c.原因：微孔间相互污染。

解决办法： 加样品时，大小鼠elisa试剂盒，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。

解决办法：请使用已校正过的移液***，并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因：添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法：加样品或试剂时，吸头请勿接触微孔。

f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。

解决办法：请随时监控洗板1机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

a.原因：室温太高(>25℃)。

解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因：底物溶液受到污染。

解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。

c.原因：反应时间超过太久。

解决办法：请控制反应时间。

d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因：微孔中的试剂未能充分混合。

解决办法： 试剂加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因：洗板过程发生问题(同2-f.)。

解决办法：请参考2-f.

c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。

解决办法： 请参考2-d.

 (1) 称取5mgHRP溶解于1ml蒸馏水中。1 U0 |) i L/ Y/ ?. ]

      (2) 于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟。: |+ }% L' N7 ?4 e2 g

      (3) 将上述溶液装入透析袋中，对1mM PH4.4的醋1酸钠缓冲液透析，4℃过夜。

  (4) 加20μl 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化桯RP的PH升高到9.0~9.5，然后立即加入10mg IgG(抗1体，或SPA5mg)在1ml 0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时。9 U# ^& ~. [7 @

      (5) 加0.1ml新配的4mg／ml NaBH4液，混匀，再置4℃2小时。# B+ T' n; v7 C' F* H5 }

      (6) 将上述液装入透析袋中，对0.15M PH7.4 PBS透析，小鼠elisa试剂盒定量检测，4℃过夜。0 m# a# G5 V# x， S7 p，小鼠elisa试剂盒， B

其余步骤(纯化)同戊二1醛标记步骤的(6)、(7)、(8)。

3）结果判定：

除标记物IgG量的计算，略有不同以外，其余均同戊二1醛法。5 {% ^% U/ T  X- Z0 U- a

IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62( Q: p$ f' X， F0 }; s

4）试剂及器材:1 x- R+ T/ e$ i' Q

      (1) 0.1M NaIO4：称取241mg高碘1酸钠(广州化学试剂厂，批号830602)溶于蒸馏水10ml中。

  (2) 1mM PH4.4醋1酸钠缓冲液:  ?. p' ﹨5 N) ?( K

   0.2M NaAc (1.361克／50ml) 3.7ml+ r% g; o& m2 r7 t4 O

   0.2M HAc (0.601ml／50ml) 6.3ml

   　加蒸馏水至2，000ml。

  (3) 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:3 ?! ﹨$ z* p7 ]' g& X. E) z( f

Na２CO３ 0.32克; s3 C. i! A5 q1 G/ w4 {

NaHCO３ 0.586克: H% E  M! O w- M

加蒸馏水至50ml

再用蒸馏水作20倍稀释，小鼠elisa试剂盒哪家好，即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。

  (4) NaBH４溶液(4mg／ml):

临用时称取NaBH４4mg溶于1ml蒸馏水中。+ h( i* [6 J， H% T

      (5) 其它的试剂及器材可参见戊二1醛标记法。

（2） 包被抗1体（或抗原）的选择：将抗1体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的***适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值***1大而蛋白量***少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。（3）　酶标记抗1体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗1体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗1体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。