原装elisa试剂盒-武汉默沙克

当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗1体。其原理为标本中的抗1体和一定量的酶标抗1体竞争与固相抗原结合。标本中抗1体量越多，结合在固相上的酶标抗1体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗1体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗1体进行竞争结合反应。竞争法测抗1体有多种模式，可将标本和酶标抗1体与固相抗原竞争结合，抗HBc 　　ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗1体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗1体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。

间接法是检测抗1体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗1体（抗人免疫球蛋白抗1体）以检测与固相抗原结合的受检抗1体，故称为间接法（见图2-3）。操作步骤如下：

1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。

2）加稀释的受检血1清，保温反应。血1清中的特异抗1体与固相抗原结合，形成固相抗原抗1体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗1体，血1清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。

3）加酶标抗抗1体。可用酶标抗人Ig以检测总抗1体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗1体。固相免疫复合物中的抗1体与酶标抗1体抗1体结合，原装elisa试剂盒，从而间接地1标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗1体的量正相关。

其步骤为：先将抗原(或抗1体)用0.05M PH9.6包被缓冲液稀释为10μg／ml左右，于聚本乙烯板孔内加0.1ml，4℃过夜，次日以洗涤缓冲液洗涤3次。酶标记抗1体用1％BSA-PBS液依次稀释成1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600……(根据据抗1体的滴度而定)，分别加入反应孔中，每个稀释度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小时后洗涤。然后加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分钟。以2M H２SO４ 0.05ml终止反应。$ J/ A& ]3 Y: S

结果判定主要以ELISA比色仪读取各孔OD值。并以OD为纵座标，结合物浓度为横座标，绘制滴定曲线。由曲线上查得OD值为1.0左右，且曲线斜率***1大时的酶标抗1体稀释度，即为该标记物的工作浓度。

有关试验的试剂及器材均见ELISA部分。

要说明的是，本法为ELISA直接法，所测的工作浓度与在实际应用中的***适浓度可相差几个滴度。这就要求在建立ELISA实验系统中，因此基础上还应进一步确定实际工作浓度(可采用方阵法)，以达到***适的实验条件。