科普：植物生理生化检测的根系活力如何测定？广州中森

科普：植物根系活力测定（TTC还原法）

测定原理：

根系活力是衡量植物根系代谢强度（尤其是脱氢酶活性）和吸收能力的重要指标。最常用的方法是氯化三苯基四氮唑（TTC）还原法。其原理是：活根系的脱氢酶能将无色的可溶性TTC还原成红色的、不溶性的三苯基甲臜（TTF）。生成的TTF量（可用红色深浅表示）与根系脱氢酶活性（即根系活力）成正比。通过提取TTF并用分光光度计测定其吸光度，即可定量计算根系活力。

广州中森检测（典型）实验步骤：

1.样品采集与处理：

*小心挖取待测植物根系，避免损伤。

*用流水快速冲洗掉泥土，再用去离子水漂洗干净。

*用吸水纸吸干表面水分。

*准确称取0.5g左右（精确至0.001g）的新鲜、均匀的根尖样品（主根尖端或侧根尖端约1-2cm），放入试管中（需做平行样和空白对照）。

2.TTC反应：

*向装有根样的试管中加入5mL0.4%TTC溶液（溶于0.06M磷酸缓冲液，pH7.0）。

*确保根系完全浸没在溶液中。

*加入1mL0.1M磷酸缓冲液（pH7.0）。

*将试管置于37°C恒温水浴中避光反应1-3小时（具体时间根据预实验确定，通常1-2小时可见明显红色）。

3.终止反应与提取：

*取出试管，立即加入2mL1MH₂SO₄终止酶反应。

*将根样小心取出，用吸水纸吸干表面液体。

*将根样放入研钵中，加入3-5mL乙酸乙酯和少量石英砂，充分研磨至根组织变白，使红色TTF完全溶解到乙酸乙酯中。

*将研磨液全部转移至10mL容量瓶或刻度离心管中，用少量乙酸乙酯冲洗研钵并并入，最后定容至10mL。

*静置或离心（3000-4000rpm,5min）使溶液澄清。

4.比色测定：

*吸取上清液于1cm光径比色皿中。

*以乙酸乙酯为参比（或空白管提取液），在分光光度计485nm波长处测定各管的吸光度（OD值）。

5.结果计算：

*根系活力通常以单位重量根系在单位时间内还原TTC的量（μgTTF/gFW·h）表示。

*根据标准曲线（用已知浓度的TTF溶于乙酸乙酯制作）将测得的OD值换算成TTF含量（μg）。

*计算公式：`根系活力(μgTTF/gFW·h)=(样品OD值-空白OD值)×标准曲线斜率×提取液总量(10mL)/[根样鲜重(g)×反应时间(h)]`

关键点：样品新鲜度、反应温度和时间、终止反应及时性、研磨提取充分度是保证结果准确的关键。广州中森等专业实验室会严格遵循SOP（标准操作程序），进行平行试验和质量控制。