科普:临床诊断液质联用检测的血样需要抗凝吗?广州中
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  • 临床诊断液质联用检测血样需要抗凝吗?

    答案是:绝大多数情况下需要,并且需要选择合适的抗凝剂。原因如下:

    1.区分血浆与血清:液质联用(LC-MS/MS)检测的目标分析物(如药物、激素、代谢物、维生素等)通常存在于血液的液体部分。

    *血清:是血液自然凝固后分离出的液体,不含纤维蛋白原和大部分凝血因子。获得血清不需要抗凝剂,但需要等待血液凝固(约30-60分钟)。

    *血浆:是加入抗凝剂阻止血液凝固后,离心分离出的液体,含有纤维蛋白原。获得血浆必须使用抗凝剂。

    2.LC-MS/MS检测的偏好:

    *血浆是首选:绝大多数临床LC-MS/MS检测项目推荐使用血浆作为样本。主要原因:

    *避免凝血过程的影响:血液凝固过程会激活血小板、释放细胞内物质、消耗某些成分(如补体、凝血因子),可能改变待测分析物的浓度或引入干扰物质。使用抗凝剂能立即阻止凝血,最大程度保持样本原始状态。

    *更快的处理速度:采血后加入抗凝剂混匀即可离心分离血浆,无需等待凝血,缩短样本前处理时间,尤其对不稳定分析物有利。

    *更高的样本量:血浆的得率通常略高于血清(约15-20%)。

    *血清的使用:虽然血清也可用于某些LC-MS/MS检测(尤其是一些激素、肿瘤标志物等),但通常是在特定方法学要求或历史沿袭下使用。除非检测项目的标准操作规程(SOP)明确指定使用血清,否则应优先使用血浆。

    广州中森检测抗凝剂选择的关键考量

    选择合适的抗凝剂至关重要,因为不同的抗凝剂可能通过以下方式干扰LC-MS/MS检测:

    *化学干扰:抗凝剂本身或其离子可能抑制或增强目标分析物的离子化效率,影响检测灵敏度和准确性。

    *金属螯合:某些抗凝剂(如EDTA)会强力螯合金属离子(如钙、镁、锌),这可能影响依赖金属离子的酶活性(虽然LC-MS/MS通常不直接测酶活性,但可能影响某些代谢物或药物结合状态)。

    *基质效应:不同抗凝剂会导致血浆基质成分略有差异,可能影响分析物在色谱柱上的保留行为或离子化过程。

    *目标分析物的稳定性:某些抗凝剂可能有助于稳定特定的不稳定分析物。

    广州中森检测(以及其他专业临床检测实验室)在选择抗凝剂时,会严格遵循以下原则:

    1.检测项目特异性:这是首要原则!实验室针对每一个具体的检测项目,都会基于方法学验证和行业指南,明确规定所需的样本类型(血浆/血清)和具体的抗凝剂种类。用户必须严格按照检测项目说明书或实验室要求采集样本。

    2.常用抗凝剂及其特点(在LC-MS/MS中的常见选择):

    *肝素(锂盐或钠盐):

    *最常见首选:肝素(尤其是肝素锂)是LC-MS/MS检测(如治疗药物监测TDM、类固醇激素、维生素D、儿茶酚胺代谢物等)中使用最广泛的抗凝剂。

    *优点:通过抑制凝血酶发挥作用,对大多数小分子分析物的干扰最小,对钙离子浓度影响小(肝素锂尤佳),与质谱兼容性好,基质效应相对较小。

    *缺点:可能干扰某些PCR检测(但对LC-MS/MS无影响)。

    *乙二胺四乙酸(EDTA,通常为K₂或K₃盐):

    *常见选择:也是广泛使用的抗凝剂,尤其适用于血液学检测和某些分子检测。

    *优点:强力螯合钙离子,抗凝效果好。

    *缺点(LC-MS/MS中需特别注意):强螯合作用可能影响某些金属依赖性分析物或酶活性检测(虽然LC-MS/MS主要测浓度)。EDTA离子本身是强螯合剂,在高浓度时可能在质谱中产生信号或导致基质效应,需要方法学优化。对于某些项目(如含金属离子的药物、某些微量元素、某些酶活性相关代谢物)可能不适用或需要特别验证。

    *柠檬酸钠(如3.2%或3.8%):

    *特定用途:主要用于凝血功能检测。

    *LC-MS/MS应用:在常规小分子LC-MS/MS检测中相对较少作为首选。其缓冲作用和对钙的螯合作用可能对某些项目有干扰。主要用于需要模拟体内生理条件或特定凝血相关研究的检测。

    3.避免使用:

    *草酸盐/氟化物:通常用于血糖检测(抑制糖酵解),但会对很多LC-MS/MS检测产生严重干扰,应避免使用,除非检测项目特别指定。

    总结与给用户的建议

    1.必须抗凝:临床诊断LC-MS/MS检测绝大多数情况下要求使用血浆样本,因此必须使用抗凝管。

    2.严格遵循项目要求:广州中森检测会为每个检测项目明确规定所需的抗凝剂类型(如肝素锂、EDTA-K₂等)或明确指出使用血清。在申请检测或采样前,务必查阅该项目的《样本采集要求》或直接咨询实验室。

    3.首选肝素(尤其肝素锂):对于未明确指定或广泛适用的小分子LC-MS/MS检测(如TDM、激素、维生素等),肝素锂抗凝血浆通常是默认和推荐的选择,因其干扰最小,与质谱兼容性最佳。

    4.正确采集与处理:使用指定抗凝管,采血后立即轻柔颠倒混匀数次(通常5-10次),确保抗凝剂与血液充分混合,避免凝块或溶血。尽快离心分离血浆/血清,并按要求保存运输。

    简而言之:液质联用检测血样绝大多数需要抗凝获得血浆。广州中森检测会根据具体检测项目的方法学要求,明确规定使用何种抗凝剂(最常用且兼容性好的是肝素锂,其次是EDTA),用户必须严格按项目要求采集样本。切勿自行选择抗凝剂。

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