荧光素酶互补实验--植物蛋白互作

荧光素酶互补实验--植物蛋白互作

  我们采用PCB1300-NLuc和PCB1300-CLuc

载体，分别将检测的2个目标基因序列克隆到对应载体上，进行融合瞬时表达，如果这个目标蛋白相互作用，因为亲和力作用，则荧光素酶的NLuc和CLuc会靠近并正确组装，从而发挥荧光素酶活性分解底物产生荧光。

Co-IP  

CO-LP实验抗体和目标蛋白高亲和性和特异性识别，目标蛋白质及其相互作用的蛋白质和抗体结合形成复合物，在利用蛋白A/G琼脂糖等亲和树脂结合抗体，将复合物从混合物中捕获下来，最后通过洗涤和离心等步骤将复合物纯化出来。进行质谱分析、免疫印迹等检测。

pull down

pull down检测蛋白和蛋白的相互作用，挑选相互作用的未知蛋白。构建目的蛋白A原核表达载体和GST标签做融合表达，构建B蛋白原核表达载体HIS标签做融合表达，分别对两种蛋白进行纯化，最后把含A蛋白的填料和B纯化液混合，通过处理后，进行SDS-PAGE检测。